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Q M20-seq技术原理是？A
M20-seq技术基于随机引物原理，在细胞（核）/细菌内原位逆转录后进行单细胞标记及测序。M20-seq基于随机引物原理可对RNA分子全长进行无偏捕获，此外可以捕获包含lncRNA、CircleRNA在内的非编码RNA。因此，M20-seq技术可在单细胞水平展开更多维度的研究。
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Q 为什么M20-seq可以进行石蜡包埋样本，RNA降解样本、细菌样本的单细胞检测？A
石蜡包埋样本，RNA降解样本均存在RNA降解情况。经典的mRNA降解通用模型中，Poly(A)尾变短（即脱腺苷化）时， poly(A)结合蛋白PABPC从mRNA上释放下来，mRNA随即被降解。而传统单细胞技术基于Poly(A)进行RNA捕获，因此对RNA完整度要求较高，对石蜡包埋样本，RNA降解样本效果较差。
而细菌RNA本身不具有 poly(A)结构，因此传统单细胞技术无法检测。
M20-seq技术基于随机引物原理，即使RNA分子有一定程度降解、没有poly(A)结构，仍可捕获RNA分子后进行细胞标记，因此可以进行石蜡包埋样本，RNA降解样本、细菌样本的单细胞检测。
M20-seq与基于poly(A)单细胞技术对比图 -
Q 基于M20-seq技术的VITA单细胞全长转录组平台包含哪几部分？A
VITA单细胞全长转录组平台包含：VITAPilote系列试剂盒、VITACruiser单细胞制备仪和VITASeer软件，均为M20 Genomics自主研发。 -
Q VITA平台实验流程是？A
实验流程如下：
实验流程图
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Q 整个实验流程耗时如何，哪些步骤可以暂停实验？A
从样本解离至文库构建完成时长约1.5-2.5天。
实验可暂停步骤：细胞核提取后、RNA逆转录后、cDNA延伸后、cDNA扩增后。
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Q 不基于poly(A)捕获，如何进行单细胞标记？A
原位逆转录结束后，在cDNA末端加上捕获接头，捕获接头可与微珠上的oligo序列互补配对。配对后进行延伸使得cDNA链加上细胞标签，完成单细胞标记。
单细胞标记示意图 -
Q 仪器设备的性能如何？A
仪器设备性能详情如下：
- 细胞通量范围：1000-20000个细胞/通道（标准试剂盒）；
- 样本通量：4个通道；
- 细胞大小：无限制，细胞、细胞核均可；
- 细胞捕获率：50%~60%；
- 双胞率：每5000个细胞，低于2%；
- 上机时间：不超过10分钟；
- 适用样本类型：新鲜，冻存，石蜡包埋（FFPE）；
- 适用物种：真核生物（人、小鼠、大鼠、植物等），原核生物（细菌等）；
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Q VITA平台数据是否兼容其他单细胞分析软件？A
第一步需要使用VITAseer进行数据处理，后续兼容其他单细胞分析软件。
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